一、配件型号基础说明
1. Kibron原厂产品目录中，没有出厂成套的“厌氧密封样品杯”标准套件，无官方SKU编号的密封杯盖、厌氧密封垫圈组件。常规样品杯为敞口设计，用于普通液相张力测试，直接测试厌氧发酵菌液会接触空气，氧化挥发性代谢物、改变菌液界面活性物质，造成曲线漂移失真。
2. 适配EZ‑Pi Plus / AquaPi Plus单通道机型的原厂样品杯物料编号。
PTFE材质样品杯，货号3640，单只包装，容积3mL，耐发酵液酸碱腐蚀，适合厌氧改造使用。
PP一次性样品杯，货号3523，10只套装，一次性使用，避免交叉污染，不适合长时间厌氧动态测试。
玻璃样品杯，原厂无公开独立SKU，需要向代理商定制订货。
3. 适配DeltaPi / DeltaPi‑4多通道机型。
选用C型全PTFE带进样口多孔板，原厂配件，单孔容积150‑1300μL，该多孔板本体带有开孔，可外接气路，适合搭建厌氧气氛环境，无配套原装密封上盖，需要二次密封改造。
4. Delta‑8高通量96孔机型。
原厂DynePlates货号8650聚丙烯微孔板，完全敞口，没有原厂厌氧密封配件，该机型不适合做长时间厌氧动态张力测试，仅适合短时间快速取样测定。
二、厌氧密闭样品杯改造配件选型（非原厂，实验室可复现）
1. 针对货号3640 PTFE 3mL样品杯改造。
密封盖主体选用PTFE材质加工盖，中心预留探针穿过小孔，孔径略大于DyneProbe探针外径；配套丁基橡胶隔垫，隔垫中心薄化，探针可以穿刺穿过，保证探针上下运动同时腔体密闭；侧面预留2个小接头，用于通入高纯氮气置换杯内氧气。整套改造件可以委托机加工按照3640样品杯外径尺寸定制。
2. 密封辅助耗材。
PTFE密封垫圈，用于杯体和密封盖之间法兰密封；微量气体针阀2个，一路氮气进气，一路出气；无氧操作手套箱或者厌氧工作站，用于菌液分装上样。
三、完整可复现厌氧发酵菌液Kibron测试操作流程
1. 仪器前期准备
仪器放置无震动、无直吹气流台面，整机通电预热60min。DyneProbe探针依次超纯水冲洗、无水乙醇冲洗，氮气吹干。25℃超纯水做张力校准，纯水张力稳定72.0‑72.8mN/m，通道偏差小于0.2mN/m。将改造完成的密闭样品杯组件安装在仪器温控样品台，检查全部气路接头，确认无漏气。
2. 氧气空白验证
密闭样品杯内部加入厌氧空白缓冲液，装配密封盖，开启氮气，控制低流速持续吹扫5‑10min置换腔体内部空气，关闭出气阀维持微弱正压。连续采集30min表面张力曲线，曲线无漂移、无明显波动，证明密封改造合格，没有氧气渗入，方可开展菌液样品测试。如果基线持续漂移，检查隔垫、垫圈密封性，重新调整。
3. 厌氧菌液上样操作
全部上样操作在厌氧工作站内部完成。取货号3640的PTFE样品杯，在厌氧环境下转移180‑220μL厌氧发酵菌液，沿杯壁缓慢加入，严禁产生气泡。将样品杯转移到仪器温控台，快速装配PTFE密封盖、丁基橡胶穿刺隔垫，探针穿过隔垫中心位置，保证探针仅接触液面，隔垫不能挤压探针。连接氮气气路，拧紧全部密封部位。
4. 气氛置换与平衡
通入高纯氮气，低流速吹扫8‑12min，置换杯内残留空气，之后调小氮气流量，维持腔体内部微正压，避免外界空气反向渗入。关闭仪器防风罩，样品在设定测试温度下静置平衡10‑15min，消除上样扰动，等待液面稳定。全程禁止大流量氮气直吹液面，气流冲击会造成张力读数剧烈波动。
5. 上机采集测试
软件设置时间扫描模式，设定测试温度，根据实验需求设置采集时长，采集间隔2‑5秒每个数据点，探针浸入深度0.3mm，探针下降速度2mm/min。确认探针正常接触菌液液面，启动采集，全程维持氮气微正压，不得拆卸密封组件。
6. 样品切换与清洗
测试结束，停止通气，在厌氧环境下拆卸密封盖，取出样品杯。探针超纯水多次冲洗，乙醇冲洗，高纯氮气吹干。PTFE样品杯使用稀酸‑纯水依次清洗，烘干备用。丁基橡胶隔垫属于消耗件，多次穿刺后密封性能下降，建议每2‑3个样品更换一片隔垫。
四、关键细节与质量控制
1. 厌氧发酵菌液含有微生物、挥发性有机酸、硫化物，一旦接触氧气，组分发生改变，表面张力曲线持续漂移，密封和氮气置换步骤不能省略。
2. 氮气流速严格控制，禁止高速气流直吹液面，气流扰动会引入巨大测试噪音。腔体维持微正压，而不是高压，防止密封盖被顶开漏气。
3. 丁基橡胶隔垫反复穿刺后会出现微小缝隙，氧气会渗入，不能无限次重复使用。
4. 不建议使用Delta‑8高通量机型做长时间厌氧动态测试，该机型无原厂密闭配件，96孔板很难实现有效的无氧密封，适合厌氧箱内取样后快速短时检测。
5. 每次实验必须同步做厌氧空白介质对照，排除气路、密封组件带来的基线漂移。
6. 发酵菌液存在菌体沉淀，测试前厌氧条件下轻柔混匀，避免剧烈震荡产生气泡，气泡会直接干扰张力数据。
免责声明：本实验方案仅为芬兰 Kibron 仪器的参考操作流程，不替代设备原厂说明书与官方操作规范，配件选型、样品测试结果受样品基质、改造配件、实验环境、人员操作等多重因素影响，本方案不对实验数据可靠性、配件适配性承担责任。
